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操作步驟
原代細胞是人工模擬細胞在體內生長(cháng)的營(yíng)養環(huán)境，是提供細胞營(yíng)養和促進(jìn)細胞生長(cháng)增殖的物質(zhì)基礎。培養液或培養基的含義幾乎相同，英文都是medium。當它是粉劑時(shí)，傾向性地稱(chēng)為培養基，而將粉劑配成液體后，多稱(chēng)為培養液。培養液中常常補加血清、抗生素等成分。

一、復蘇

 1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。

 2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來(lái))，1000轉離心5分鐘。

 3.把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養皿中的細胞均勻分布。

 4.標好細胞種類(lèi)和日期、培養人名字等，放到CO2培養箱中培養，細胞貼壁后換培養基。

 5.3天換一次培養基。

 二、傳代

 1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時(shí)要傳代。

 2.把原有培養基吸掉。

 3.加適當的(能覆蓋細胞就行)，消化1-2分鐘。

 4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。

 5.用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來(lái)。

 6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。

 7.倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來(lái)。

 8.根據細胞種類(lèi)把細胞傳到幾個(gè)培養皿中。一般，癌細胞分5個(gè)，正常細胞傳3個(gè)，繼續培養。

 三、凍存

 把細胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細胞種類(lèi)，凍存日期4℃30min，-20℃30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。

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